Pasgan lorgaidh searbhag niuclasach Coronavirus (SARS-Cov-2).
New Cobhnavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flumèinnscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Coronavirus ùr (SARS-Cov-2) pasgan lorg searbhag niuclasach (dòigh sgrùdaidh fluorescent RT-PCR)
【Packaging specifications 】25 Deuchainnean / Kit
【Intended usaois】
Tha am pasgan seo air a chleachdadh airson lorg càileachdail searbhag niuclasach bho coronavirus ùr ann an swaban nasopharyngeal, swaban oropharyngeal (amhach), swaban nasal anterior, swaban meadhan-turbinate, nighe nasal agus miannan nasal bho dhaoine fa leth a tha fo amharas COVID19 leis an t-solaraiche cùram slàinte aca. Faodar lorg ginean ORF1ab agus N den coronavirus ùr a chleachdadh airson breithneachadh cuideachail agus sgrùdadh epidemio-eòlasach air galar coronavirus ùr.
【Principles of the prosgdure 】
Tha am pasgan seo air a dhealbhadh airson probes TaqMan sònraichte agus primers sònraichte air an dealbhadh airson an nobhail coronavirus (SARS-Cov-2) ORF1ab agus sreathan gine N. Tha am fuasgladh ath-bhualadh PCR a’ toirt a-steach seataichean 3 de phrìomhairean sònraichte agus probes flùraiseach airson targaidean sònraichte a lorg, agus thathas a’ cleachdadh seata a bharrachd de phrìomhairean sònraichte agus probes flùraiseach mar smachd àbhaisteach a-staigh air a’ ghoireas airson a bhith a’ lorg ghinean gleidhidh taighe endogenous.
Is e am prionnsapal deuchainn gu bheil an probe fluorescent sònraichte air a chnàmh agus air a lughdachadh le gnìomhachd exonuclease an enzyme Taq anns an ath-bhualadh PCR, gus am bi a’ bhuidheann fluorescent neach-aithris agus a ’bhuidheann fluorescent quenched air an sgaradh, gus am faigh an siostam sgrùdaidh fluorescence fluorescent comharra, agus an uairsin Tro bhuaidh beairteachaidh meudachaidh PCR, bidh comharra fluorescence an probe a’ ruighinn luach luach-Ct stairsnich stèidhichte (stairsneach baidhsagal). Mura h-eil amplicon targaid ann, tha buidheann aithris an probe faisg air a’ bhuidheann quenching. Aig an àm seo, bidh gluasad lùth ath-shuidheachadh fluorescence a ’tachairt, agus tha fluorescence na buidhne neach-aithris air a chuir às leis a’ bhuidheann quenching, gus nach lorgar an comharra fluorescent leis an ionnstramaid PCR fluorescent.
Gus sùil a chumail air cleachdadh ath-bheachdan rè an deuchainn, tha an uidheamachd uidheamaichte le smachdan adhartach is àicheil: tha an smachd adhartach a’ toirt a-steach plasmid ath-chuingealaichte làrach targaid, agus is e an smachd àicheil uisge grùide, a thathas a’ cleachdadh gus sùil a chumail air truailleadh na h-àrainneachd. Thathas a’ moladh smachd adhartach agus smachd àicheil a shuidheachadh aig an aon àm nuair a thathar a’ dèanamh deuchainn.
【Main compònaints 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Componean | |
Name | Specsàthadh | Quantity | Quantity | |
Smachd adhartach | 180 μL / vial | 1 | 1 | Plasmids air an togail gu h-ealanta, uisge grùide |
Smachd àicheil | 180 μL / vial | 1 | 1 | Uisge sgileil |
Measgachadh SARS-Cov-2 | 358.5 μL / vial | 1 | / | Paidhrichean primer sònraichte, probes flùraiseach lorg sònraichte, dNTPn, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, uisge grùide, msaa. |
Enzyme measgachadh | 16.5 μL / vial | 1 | / | Taq enzymes, cùl transcriptase, UNG enzymes, msaa. |
Measgachadh SARS-Cov-2 (Lyophilised) | 25 deuchainn / vial | / | 1 | Paidhrichean primer sònraichte, probes flùraiseach lorg sònraichte, dNTPn, enzymes Taq, transcriptase cùil, uisge grùide, msaa. |
Bufair 2x | 375 μL / vial | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, uisge grùide, msaa. |
Thoir an aire:(1) Chan urrainnear na co-phàirtean ann an diofar innealan baidse a mheasgachadh no eadar-ghluasad.
(2) Ullaich an reagent agad fhèin: pasgan às-tharraing searbhag niuclasach.
【Storage conditions agus expiration date 】
For BST-SARS-25:Còmhdhail agus stòradh aig -20 ± 5 ℃ airson ùine fhada.
For BST-SARS-DR-25:Còmhdhail aig teòthachd an t-seòmair. Stòradh aig -20 ± 5 ℃ airson ùine fhada.
Seachain cuairtean reòta-loisgeach a-rithist. Tha an ùine dligheachd air a shuidheachadh gu mì-chinnteach airson 12 mìosan.
Faic an leubail airson ceann-latha saothrachaidh agus cleachdadh.
Às deidh a ’chiad fhosgladh, faodar an ath-ghnìomhach a stòradh aig -20 ± 5 ° C airson gun a bhith nas fhaide na 1 mìos no gu deireadh ùine an ath-ghnìomhaiche, ge bith dè an ceann-latha a thig an toiseach, gus cearcallan reòthadh ath-aithris a sheachnadh, agus an àireamh de reothadh ath-ghnìomhach. - cha bu chòir na cuairtean a bhith nas fhaide na 6 tursan.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
Seòrsa sampall 1.Applicable: Fuasgladh searbhag niuclasach air a thoirt a-mach.
2.Sample stòradh agus còmhdhail: Bùth aig-20 ± 5 ℃ airson 6 months.Freeze agus leaghadh na sampaill gun a bhith nas fhaide na 6 tursan.
【Tthaing methòd】
1.Nucleic acid extraction
Tagh pasgan às-tharraing searbhag niuclasach iomchaidh gus searbhag niuclasach viral a thoirt a-mach, agus lean an stiùireadh uidheamachd iomchaidh. Thathas a’ moladh inneal às-tharraing agus glanaidh searbhag niuclasach a chleachdadh le Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. no pasgan glanaidh searbhag niuclasach co-ionann.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Thoir air falbh am measgachadh SARS-Cov-2 agus Enzyme Mix, leaghadh gu tur aig teòthachd an t-seòmair measgachadh gu mionaideach le inneal Vortex agus an uairsin centrifuge goirid.
(2) Chaidh 16.5uL Enzyme Mix a chur ri 358.5uL SARS-Cov-2 Mix agus measgachadh gu mionaideach gus am fuasgladh ath-bhualadh measgaichte fhaighinn.
(3) Ullaich tiùb octal PCR 0.2 mL glan agus comharraich e le 15uL den fhuasgladh ath-bhualadh measgaichte gu h-àrd gach tobar.
(4) Cuir ris 15 μL de fhuasgladh searbhag niuclasach fìor-ghlan, an smachd adhartach agus an smachd àicheil, agus còmhdaich gu faiceallach an caip tiùb octal.
(5) Measgaich gu math le bhith a’ tionndadh bun os cionn, agus centrifuge gu sgiobalta gus an leaghan a chuimseachadh aig bonn an tiùba.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Cuir 375ul 2x Buffer ri SARS-Cov-2 Mix ((Lyophilised) gus am measgachadh ath-bhualadh ullachadh. Measgachadh gu mionaideach le bhith a’ pìobadh agus an uairsin centrifuge goirid. ( Cho luath ‘s a bhios measgachadh ath-bhualadh deiseil, thathas a’ moladh a stòradh aig -20 ℃ aig stòradh fad-ùine.)
(2) Ullaich tiùb octal PCR 0.2 mL glan agus comharraich e le 15μL de mheasgachadh ath-bhualadh gach tobar.
(3) Cuir 15μL de fhuasgladh searbhag niuclasach fìor-ghlan, an smachd adhartach agus an smachd àicheil, agus còmhdaich gu faiceallach an caip tiùb octal.
(4) Measgaich gu math le bhith a’ tionndadh bun os cionn, agus centrifuge gu sgiobalta gus an leaghan a chuimseachadh aig bonn an tiùba.
3. PCR amplification (Feuch an toir thu sùil air leabhar-làimhe an ionnstramaid airson roghainnean obrachaidh.)
3. 1 Cuir an PCR 8-tube a-steach don t-seòmar sampall den ionnstramaid PCR fluorescent, agus suidhich an sampall a thèid a dhearbhadh, an smachd adhartach agus an smachd àicheil a rèir òrdugh an luchdaidh.
3.2 Sianal lorg fluorescence:
(1) Bidh gine ORF1ab a’ taghadh an t-sianal lorgaidh FAM (Neach-aithris: FAM, Quencher: Chan eil gin).
(2) Bidh N gine a’ taghadh an t-sianal lorgaidh de VIC (Neach-aithris: VIC, Quencher: Chan eil gin).
(3) Bidh gine àbhaisteach a-staigh a’ taghadh an t-sianal lorgaidh CY5 (Neach-aithris: CY5, Quencher: Chan eil gin).
(4) Tha an Iomradh Fulangach air a shuidheachadh gu ROX.
3.3 suidheachadh paramadair prògram PCR:
Ceum | Teòthachd ( ℃) | Uair | An àireamh de chuairtean | |
1 | Freagairt ath-sgrìobhaidh air ais | 50 | 15 mion | 1 |
2 | Taq enzyme a chur an gnìomh | 95 | 2.5 min | 1 |
3 | Taq enzyme a chur an gnìomh | 93 | 10 s | 43 |
Leudachadh annealing agus togail fluorescence | 55 | 30 s |
Às deidh dhut a shuidheachadh, sàbhail am faidhle agus ruith am prògram freagairt.
4.Results analysis
Às deidh don phrògram crìochnachadh, thèid na toraidhean a shàbhaladh gu fèin-ghluasadach, agus thèid an lùb leudachaidh a sgrùdadh. Tha an lùb leudachaidh air a shuidheachadh gu stairsneach bunaiteach an ionnstramaid.
【Explanation of test results 】
1. Obraich a-mach èifeachd an deuchainn: Bu chòir lùb leudachaidh àbhaisteach a bhith aig an FAM smachd adhartach, sianal VIC, agus tha luach Ct sa chumantas nas ìsle na 34, ach faodaidh e atharrachadh air sgàth diofar shuidheachaidhean stairsnich de dhiofar ionnstramaidean. Bu chòir an sianal smachd àicheil FAM, VIC a bhith neo-leasaichte Ct. Thathas ag aontachadh gum feumar na riatanasan gu h-àrd a choileanadh aig an aon àm, air neo tha an deuchainn seo neo-dhligheach.
2. Breithneachadh toraidh
sianal FAM/VIC | Toradh a’ bhreitheanais |
Ct<37 | Tha sampall deuchainn dearbhach |
37≤Ct<40 | Tha an lùb leudachaidh ann an cumadh S, agus feumar sampallan amharasach ath-sgrùdadh; ma tha toraidhean an ath-sgrùdaidh cunbhalach, thathas a’ meas gu bheil e deimhinneach, air neo tha e àicheil |
Ct≥40 No Gun leudachadh | Tha sampall deuchainn àicheil (no nas ìsle na a’ chrìoch as ìsle de lorg uidheamachd) |
Nota: (1) Ma tha an dà chuid an sianal FAM agus an sianal VIC deimhinneach aig an aon àm, tha an SARS-Cov-2 air a dhearbhadh gu bheil e deimhinneach.
(2) Ma tha an sianal FAM no an sianal VIC deimhinneach agus gu bheil an sianal eile àicheil, bu chòir an deuchainn a dhèanamh a-rithist. Ma tha e deimhinneach aig an aon àm, thèid a mheas mar SARS-Cov-2 deimhinneach, air neo thèid a mheas mar SARS-Cov-2 àicheil.